Xét nghiệm bổ sung huỳnh quang phân tử (BiFC) là một phương pháp được sử dụng để hình dung trực tiếp tương tác protein-protein in vivo bằng cách sử dụng hình ảnh tế bào sống hoặc tế bào cố định. … BiFC lần đầu tiên được mô tả bởi Hu et al.
Bổ sung huỳnh quang hai phân tử hoạt động như thế nào?
Nguyên tắc hoạt động của BiFC dựa trên sự phát triển của phức hợp huỳnh quang, là kết quả của sự liên kết của hai phân đoạn của protein huỳnh quang khi chúng ở gần nhau do sự tương tác giữa protein và protein trong các phân đoạn, tức là, trong BiFC, một fluorophore được chia thành các đầu tận cùng là amino và carboxyl.
Thử nghiệm BiFC là gì?
xét nghiệm bổ sung huỳnh quang hai phân tử (BiFC) cho phép hình dung trực tiếp và đơn giản về các tương tác protein trong tế bào sống(45). Phương pháp tiếp cận BiFC dựa trên sự hình thành phức hợp huỳnh quang khi hai protein dung hợp với nhau thành các đoạn không huỳnh quang của một protein huỳnh quang tương tác với nhau (Hình.
Tại sao thử nghiệm BiFC được thực hiện?
Ý tưởng của BiFC là để thể hiện một nửa GFP được kết hợp với các protein mà bạn quan tâmNếu POI tương tác, bạn có thể kết hợp cả hai nửa lại với nhau để có được GFP chức năng. Vì vậy, nếu có một nửa GFP được biểu hiện trong tế bào, tôi không ngạc nhiên khi một kháng thể GFP có thể phát hiện ra nó.
BiFC có đảo ngược được không?
Tính không thể đảo ngược của phức hợp BiFC đã được ghi nhận rõ ràng (10), và có vẻ như hầu hết, nếu không phải tất cả, hệ thống protein huỳnh quang dựa trên BiFC là không thể đảo ngược(8, 33, 43, 48–51).
